斑马鱼胚胎通过雌激素受体检测内分泌活性物质.jpg)
2
软件简介
化学品 EASZY试验 利用转基因tg
(cyp19a1b:GFP)斑马鱼胚胎通过
雌激素受体检测内分泌活性物质
1 范围
本文件描述了利用转基因tg(cyp19a1b:GFP)斑马鱼胚胎通过雌激素受体检测内分泌活性物质的
EASZY 试验方法,包括试验原理、受试物信息、能力验证化学品、试验准备、试验程序、数据分析和结果
评价、质量保证与质量控制、结果报告。
本文件适用于筛选和评估化学品中的内分泌活性物质。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T13266 水质 物质对蚤类(大型蚤)急性毒性测定方法
3 术语和定义、缩略语
3.1 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1.1
激动剂 agonist
能结合并激活特异性核受体,诱导核受体调控基因转录活性的化学物质或配体。
3.1.2
拮抗剂 antagonist
能结合核受体,阻断或者抑制激动剂配体介导的反应的化学物质或配体。
3.1.3
活性受试物 activetestchemical
能显著诱导 GFP表达且对 GFP的最低平均诱导水平大于空白对照组两倍的受试化合物。
3.1.4
脑芳香化酶 brainaromatase
由cyp19a1b 基因编码,负责雌激素的内源性合成的酶。
3.1.5
效应浓度 effectconcentration;EC
x
在给定测试周期内,与对照组相比,导致胚胎荧光强度降低x%的受试物浓度。
3.1.6
雌激素活性 estrogenicactivity
受试物模拟17β-雌二醇作用的能力,以雌激素受体特异性的方式激活内源性cyp19a1b 和/或由
cyp19a1b 启动子驱动的表达 GFP的能力。
3.1.7
诱导倍数 foldinduction
单个胚胎荧光强度与空白对照组胚胎平均荧光强度的比值。
3.1.8
非活性受试物 inactivetestchemical
GFP平均表达强度不大于对照组的两倍,对 GFP表达没有显著影响的物质。
3.1.9
荧光强度 integrateddensity
感兴趣区中所有像素强度的总和。
3.1.10
胚胎最大耐受浓度 maximumtoleratedconcentration;MTC
试验结束时,每个平行的胚胎死亡数不超过1的受试物的最高浓度。
3.1.11
能力验证化学品 proficiencychemical
用于表明实验室具有标准化测试技术能力的一系列参比物。
3.1.12
相关性 relevance
用于描述试验方法与目标效应的关系,以及对特定效应是否具有意义和作用。
注:用于判断试验方法是否能正确测定或预测所关注的生物学效应及其准确性,同时考虑了试验方法的准确性。
3.1.13
tg(cyp19a1b:GFP)
转基因斑马鱼在cyp19a1b 启动子控制下稳定表达绿色荧光蛋白的报告基因。
3.2 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
Dpf:受精后天数(Daypost-fertilization)
DMSO:二甲基亚砜(DimethylSulfoxide)
EE2:17α-乙炔雌二醇(17α-ethinylestradiol)
E2:17β-雌二醇(17β-estradiol)
ER:雌激素受体(EstrogenReceptor)
ERE:雌激素反应元件(EstrogenResponseElement)
GFP:绿色荧光蛋白(GreenFluorescentProtein)
GxRE:胶质细胞x反应元件(Glialx-ResponsiveElement)
Hpf:受精后的小时数(Hourspostfertilization)
ROI:感兴趣区(RegionofInterest)
4 试验原理
将受精的斑马鱼卵(受精4h内)在半静态条件下暴露于受试物中96h,每24h更新一次试验溶液。试验结束时,使用荧光显微镜测定每个新孵化胚胎的荧光,采用图像分析软件定量 GFP 的荧光
强度。
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